2019年1月22日 星期二
欢迎光临中华神经泌尿与尿动力网!
您的位置:首页 >> 医学论文>>
雌性大鼠尿道壁内横纹括约肌一氧化氮合酶分布的免疫组化研究
2009-03-02   作者:鞠彦合,邱志勇   来源:

    详细了解尿道外括约肌的解剖、神经支配和生理功能对于理解控尿机制至关重要。一般认为,尿道外括约肌复合体包括黏膜下层,内层较厚的纵行平滑肌,外面薄层环行平滑肌,壁内横纹肌以及尿道周围横纹肌。它负责产生最大的尿道压力。其中尿道壁内横纹肌的张力是维持控尿的主要因素。然而,关于其详细神经支配尚未达成共识。我们采用免疫组化方法研究了一氧化氮合酶(NOS)在雌性大鼠尿道壁内横纹肌的分布情况。

       1材料与方法

         1.1材料雌性Wistar 3个月龄未育大鼠4只,体重240250 g,购自北京动物研究所。SP试剂盒购自中山生物技术有限公司, 多克隆nNOS抗体购自美国Santa Cruz公司。

         1.2方法水合氯醛腹腔注射麻醉后,解剖膀胱和尿道全长标本,连同阴道前壁一块切下,于福尔马林中固定,石蜡包埋。2只做平行尿道长轴的纵行切片,2只做垂直尿道的横行切片。组织切片做常规HE染色以及Mallory磷钨酸苏木素染色了解尿道的显微解剖,定位尿道横纹括约肌后局部进行nNOS免疫组化染色。大体步骤如下:切片经磷酸盐缓冲液水洗后,加一抗(150的兔抗人多克隆nNOS抗体),4 孵育过夜,磷酸盐缓冲液水洗后加生物素标记的羊抗兔IgG,然后滴加SP溶液, 温浴水洗后DAB显色,染色封片,用图像分析系统LeicaQ500IW作图像分析。

        2结果雌性Wistar大鼠的尿道为一长约1.52.0 cm的管状结构。其典型的组织结构由外向内依次为:环行横纹肌纤维层、环行平滑肌纤维层、纵行平滑肌纤维层、致密结缔组织层和上皮层。全尿道标本纵切面显示尿道壁内横纹括约肌并不分布于尿道全长,而是仅环绕尿道的中下段。横切面显示尿道壁内横纹括约肌呈封闭环形,约510层不等,但并不是均匀分布,后壁横纹肌层较前壁为厚,层数稍多。nNOS免疫活性在部分尿道壁内横纹肌内呈强阳性表达。

        3讨论无论男性或女性,其尿道壁内的横纹肌与尿道周围的盆底横纹肌有所区别。尿道壁内横纹肌成马蹄状,肌细胞小于常规的横纹肌细胞,直径大约为15~20 μm左右。从生物学特性来看,尿道壁内横纹肌细胞主要为慢反应肌纤维(Ⅰ型横纹肌纤维)。也有人认为其组成是多元性的,来自器官捐献者的资料显示,男性尿道壁内横纹肌快反应纤维占35%,慢反应纤维占65%;女性则快反应纤维占13%,慢反应纤维占87%1.慢反应纤维收缩速度虽然较慢,但能长时间维持一定的张力,这种持续的张力对闭合尿道起着重要的作用。快反应纤维收缩速度较快,但维持时间较短,对尿道闭合起着辅助作用,条件不合适时其快速收缩可以达到憋尿和抑制逼尿肌反射的功效。因此,尿道横纹肌的主要作用是在膀胱充盈期协助产生持续的尿道压力,并在腹压增加时反射性收缩提高尿道压力,以防止尿失禁的发生。前列腺根治性切除患者尽管收缩盆底能暂时控尿,但由于缺乏以慢反应纤维为主的尿道壁内横纹肌,仍可出现较明显的尿失禁。尿道周围盆底横纹肌主要包括尿生殖隔肌肉和肛提肌等,为快反应纤维(Ⅱ型横纹肌纤维),收缩速度快,但维持时间短。我们的显微解剖研究发现,雌性大鼠的尿道与人类女性尿道的组织结构基本一致,由外向内依次为:环行横纹肌纤维层、环行平滑肌纤维层、纵行平滑肌纤维层、致密结缔组织层和上皮层。我们重点研究了尿道壁内横纹肌的结构,发现壁内横纹括约肌并不分布于尿道全长,而是仅环绕尿道的中下段;在横切面上呈封闭环形,约510层不等,但并不是均匀分布,后壁横纹肌层较前壁为厚,层数稍多。目前对尿道黏膜下层、壁内平滑肌、壁内横纹肌等对尿道闭合压的各自贡献尚未达成一致意见,从理论上说,这些因素都有助于尿道的控尿功能。一般认为,尿道壁内的横纹肌、平滑肌和尿道黏膜在控尿中的作用各占1/32]。通过研究荷兰猪的尿道平滑肌和横纹肌对cromakalim(钾通道开放剂)、prazosinnifidipinenitroprusside和电刺激的反应,von Heyden证实,尿道横纹括约肌在括约肌功能中起主导作用[3]。Thind对健康女性的研究发现,尼古丁样神经肌肉阻滞剂对尿道环行横纹肌有阻滞作用,降低尿道压力很少超过40%,提示尿道平滑肌在控尿中也起重要的作用,α肾上腺素受体阻滞剂可降低尿道压力达1/3左右[4]。多个研究显示,尿道横纹肌的肌源性损伤在Ⅲ型压力性尿失禁的发病中具有重要作用。Takahashi等发现,与正常对照相比,尿失禁患者尿道横纹肌运动单位的电位期相明显缩短,电位低且有多个期相;70%的压力性尿失禁患者有明显的低电位(<350 μV)、短期间(<45 ms)、多期相和早期干涉现象[5]。这些都是横纹肌肌源性损伤的表现。这些有横纹肌肌源性损伤的患者腹后性漏尿点压力明显降低,日常有更多的漏尿,需要更多的尿垫。尿道周围盆底横纹肌公认由起自S2-4的阴部神经支配,属躯体神经。关于尿道壁内的神经支配极为复杂。尿道内存在壁内神经节,大约由2~30个神经元组成。这些神经节中含有乙酰胆碱合成酶、酪氨酸羟化酶、NOS、血氧化酶(合成CO所需的酶)等染色阳性的神经纤维。乙酰胆碱和去甲肾上腺素兴奋主要引起尿道的收缩,可能主要以去甲肾上腺素能神经的作用为主,尿道内发现有较多的α1肾上腺素能受体。含有NOS的神经主要起着松弛尿道的作用,对于平滑肌的松弛作用已得到公认[6.8]。横纹尿道括约肌有来自S2-4并经阴部神经支配的体神经分布,也有来自盆腔神经丛的自主神经分布。研究可发现一些乙酰胆碱合成酶染色阳性的神经纤维终板止于横纹括约肌上。免疫组化研究还发现,人类尿道膜部壁内横纹括约肌中有含NOS的干神经纤维和散在的细神经纤维,且绝大多数的快反应横纹肌和1/4慢反应横纹肌的肌纤维膜上NOS染色阳性[1]。在人类功能性神经可能为体神经,而通过自主神经的调节也不能除外。Kamo等研究了大鼠应力期尿道压力的变化,发现在喷嚏时,尿道近段和中段的压力升高,但当减去膀胱压力或打开腹腔时,近段尿道的压力几乎变成了零,而尿道中段的压力依然是正值[9]。这些发现明确地排除了近段尿道在控尿中具有主导作用的可能性。当切断两侧的阴部神经和支配坐骨尾骨肌和耻骨尾骨肌的神经后,尿道中段在喷嚏时的压力下降达80%,而盆神经的内脏支和下腹下神经的横断则无此效应。他们还测定了喷嚏漏尿点压力以探讨尿道主动关闭机制在保持尿道阻力,对抗喷嚏时尿失禁中的作用。在假手术组大鼠,喷嚏时膀胱压力升高达(37±2.2cmH2O(1cmH2O=98.0665 Pa)但无漏尿,而神经切断组大鼠喷嚏时膀胱压力超过(16.3±2.1) cmH2O即有漏尿发生。

    我们的研究证实,大鼠尿道壁内横纹肌有nNOS的分布,为进一步了解其功能奠定了良好的基础。但是氮能神经在尿道横纹括约肌的神经调控中如何发挥作用以及NOS在排尿反射的神经化学重塑的变化与作用等问题均需进一步研究。

媒体报道
关于我们|联系我们|设为收藏| 隐私声明
地址:北京市丰台区角门北路10号泌尿外科 TEL:(010)-87569046 联系人:刘医生
中华神经泌尿与尿动力网 版权所有 未经本站同意,不得转载本网站之所有信息及案例   京ICP备13016250号